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标题：Desenvolvimento e validação de método analítico para quantificação de doxiciclina em plasma humano
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作者：Geysa Aguiar Romeu ; Eunice Kazue Kano ; Clarice Madalena Bueno Rolim 等
期刊名称：Revista Brasileira em Promoção da Saúde
印刷版ISSN：1806-1222
电子版ISSN：1806-1230
出版年度：2007
卷号：20
期号：3
页码：193-198
语种：Portuguese
出版社：Universidade de Fortaleza
摘要：determinação de doxiciclina em plasma humano por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). A doxiciclina e oxitetraciclina (padrão interno), foram extraídas de 0,5 mL de plasma com acetato de etila. Utilizaram-se o sistema de CLAE com bomba isocrática, com temperatura controlada (30°C) e coluna cromatográfica Phenomenex® Luna C8 (15,0 cm x 4,6 mm; partícula 4 μm). A fase móvel, constituída por mistura de água, acetonitrila e tetrahidrofurano (80:15:5 v/v/v), teve pH ajustado para 2,5 sendo bombeada para o sistema cromatográfico em fluxo de 1,0 mL/min. Utilizou-se detector ultravioleta com comprimento de onda de 357 nm. Investigaram-se os seguintes parâmetros de validação: especificidade, linearidade (r2 = 0,9946), precisão, exatidão, recuperação e estabilidade. O limite de quantificação encontrado foi de 0,25μg/mL. Nas condições do ensaio, doxiciclina e oxitretaciclina apresentaram tempo de retenção de 7,5 e 2,4 minutos, respectivamente. Não foram observadas interferências com compostos endógenos ou com anticoagulante. Obtevese recuperação média para doxiciclina de 84,57% e de 80,73% para o padrão interno na concentração de 20 μg/mL. O método mostrou-se preciso e exato tanto em análises realizadas no mesmo dia (intra-dia) quanto em dias diferentes (inter-dias). As amostras mantiveramse estáveis no tempo e condições de análise, por pelo menos 120 dias, à temperatura de -20°C, durante a injeção no cromatógrafo (24 horas) e quando analisadas após três ciclos de congelamento e descongelamento. O método desenvolvido demonstrou-se adequado à quantificação de doxiciclina em amostras de plasma humano, apresentando sensibilidade, precisão e exatidão dentro dos limites estabelecidos para análises deste tipo.
其他摘要：The aim of this study was to develop and validate a simple, quick and sensitive assay for determination of doxycycline concentration in human plasma by High Performance Liquid Chromatography (HPLC). Doxycycline and Oxytetracycline (internal standard) were extracted from 0,5 mL human plasma into ethyl acetate. The HPLC system was operated isocratically at controlled temperature (30°C) with reversed phase Phenomenex Luna C8 column (150 mm x 4.6mm i.d.; 4 μm particle size) and using a mobile phase consisting in water: acetonitrile: tetrahydrofuran (80:15:5 v/v/v) adjusted to pH 2.5, at a flow rate of 1.0 mL/min. Detection was achieved with a UV detector at 357 nm. Method validation investigated parameters such as the sensitivity, linearity (r2= 0.9946), precision, accuracy, recovery and stability. The limit of quantification was 0,25 μg/mL. Under the assay conditions, doxycycline and oxytetracycline had retention times of 7,5 and 2,4 minutes, respectively. No interferences with endogenous compounds or with anticoagulant were observed. The mean recovery of doxycycline was 84.57%, and 80.73% for the intern standard at working concentration (20μg/mL). The method showed to be precise and accurate both for analyses held in a same day (intra-day) as in different days (inter-days). A good stability of doxycycline and oxytetracycline was observed during extraction and analysis, when stored over a fourmonth period at -20°C, on the auto sample during 24 hours and to 3 freeze-thaw cycles. The present method is suitable for sensitive, precise and accurate determination of doxycycline concentrations in human plasma, within the limits established for this type of analyses.
关键词：Doxycycline; Chromatography; Liquid; Plasma; Validation Studies;Doxiciclina; Cromatografia Líquida; Plasma; Estudos de Validação