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  • 标题:Aspergillus niger 由来組換え α-グルコシダーゼの Emericella nidulans での過剰発現,精製および諸性質
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  • 作者:小川 真弘 ; 西尾 俊幸 ; 箕浦 佳代
  • 期刊名称:Journal of Applied Glycoscience
  • 印刷版ISSN:1344-7882
  • 电子版ISSN:1880-7291
  • 出版年度:2006
  • 卷号:53
  • 期号:1
  • 页码:13-16
  • DOI:10.5458/jag.53.13
  • 出版社:The Japanese Society of Applied Glycoscience
  • 摘要:

    Aspergillus niger GN-3由来のα-グルコシダーゼの遺伝子( agl A)を含む発現用プラスミドを構築し(Fig. 1), Emericella nidulans JCM10259に挿入して組換え酵素を発現させた(Fig. 2).組換えα-グルコシダーゼは,培養液1リットル中に約61mg分泌されていると見積もられた。組換え酵素は,培養液より硫安塩析,2回のイオン交換カラムクロマトグラフィー,およびゲル濾過カラムクロマトグラフィーにより精製された.精製組換え酵素は, Aspergillus niger GN-3由来のもの(野生型酵素)と同様に,二つのサブユニットから形成されていることが確認された.組換え酵素は,野生型酵素よりも分子質量が若干小さいことがSDS-PAGEにより確認された(Fig. 3).これは,酵素タンパク質に結合している糖鎖が,両者間で異なることに起因するものと推測される.酵素活性の最適pHや基質特異性については,組換え酵素と野生型酵素では同じであった(Table 1).

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